贵州医科大学2022年研究生招生自命题803生物医学工程考试大纲

功能来限定检索，高级检索功能，利用模糊的题录信息来查 找单篇文章，把握 PubMed 检索结果输出的页面，使用 MeSH 主题词检索。
2.生物信息数据库： 生物信息数据库概述，生物信息数据库 的查找方法，核酸序列数据库，蛋白质序列数据库，生物大 分子结构数据库（蛋白质结构数据库） ，通过 NCBI 获取序 列信息。
3.NCBI 获取序列数据及序列比对基础： 序列比对的概念、目 的、 比对形式和基本原理，序列比对的应用，序列比对的算 法和程序，BLAST 搜索的基本步骤，BLAST 搜索结果及其判 读。
4.核酸序列分析： 核酸序列的基本分析，EST 的分析与电子 克隆，基因表达的核酸序列分析，基因调控的核酸序列分析。 5.蛋白质序列分析： 蛋白质序列的检索，蛋白质序列的比对， 蛋白质基本性质分析，蛋白质功能预测，蛋白质结构预测。 6.系统发育分析和分子进化： 分子系统发生与系统发生树， 分子进化模型，分子系统树的构建，分子系统发生分析软件 及应用。
六、基因工程
（ 一）绪论
1.基因及基因工程的概念。

2.基因工程诞生的理论基础和技术突破。
3.基因工程的诞生与发展。
4.基因工程的基本过程： 分离目的基因，切割目的基因和载 体， 目的基因与载体重组，重组质粒 DNA 转入受体细胞，筛 选与鉴定阳性克隆， 目的基因的表达与应用。
（ 二）工具酶
1.限制性核酸内切酶： 基本概念和特性，命名原则，分类， 产生的末端，影响酶活性的因素。
2.DNA 连接酶： 基本性质和特点； 连接反应条件； 影响酶活 性的因素。
3.DNA 聚合酶： 大肠杆菌 DNA 聚合酶的基本性质和特点， Klenow 片段的基本性质和特点，测序酶的基本性质和特点， 反转录酶的基本性质和特点，Taq 聚合酶的基本性质和特点。 4.DNA 修饰酶： 末端脱氧核苷酸转移酶的基本性质和特点， T4 多核苷酸激酶的基本性质和特点，碱性磷酸酶的基本性质 和特点。
5.核酸酶： DNase I 的基本性质和作用，RNase A 的基本性 质和作用。
（ 三） 基因工程载体
1.载体的概念及特征： 载体概念，克隆载体必须具备的基本 条件。

2.载体的分类。
3.克隆载体： 概念，质粒的生物学特性，理想质粒载体的必 备条件，克隆质粒载体的类型， λ噬菌体载体，单链 DNA 噬 菌体载体，黏粒载体，T-A 克隆载体，人工染色体载体（YAC, BAC, MAC)的概念和关键序列。                         4.表达载体的概念和构建原则。
（ 四） 分离目的基因
1.基因组 DNA 的提取： SDS 法，CTAB 法。
2.质粒 DNA 的提取： 碱裂解法的操作过程、溶液的作用，煮 沸法。
3.RNA 的提取和 mRNA 的纯化： 操作过程及注意 RNase 的污染。 4.化学合成法获得目的基因： 原理，合成过程，合成基因的 组装。
5.PCR 法获得目的基因： PCR 概念，原理，扩增过程，反应 体系，引物设计原则，PCR 类型（ 常规 PCR 扩增、反向 PCR、 反转录 PCR、RACE 技术、荧光定量 PCR 技术）。           6.基因文库法获得目的基因： 基因组文库和 cDNA 文库的概 念和差别，构建过程。
（ 五）DNA 的重组
1. 目的基因和载体的酶切。
2. 目的基因和载体的连接。

3. 目的基因和载体的重组过程及影响因素。
（ 六） 转化子的筛选与鉴定
1.基本概念： 转化、转化子、阳性转化子、转化率。      2.转化子的筛选与鉴定方法： DNA 水平检测（检测目的基因 是否导入受体细胞中，包括遗传标记筛选，蓝白斑筛选， Southern 杂交、PCR 法、DNA 序列分析法（Sanger 双脱氧测 序） 、直接凝胶电泳法、酶切片段分析法） ，RNA 水平检测 （检测特定外源基因是否转录及转录的强度，包括 Northern 杂交印迹法、荧光定量 PCR 技术)，蛋白质水平检测（检测 目的基因是否表达及表达的强度，包括放射性抗体检测法、 免疫沉淀检测法、Western 印迹杂交法、ELISA 检测)，各种 筛选与鉴定方法的原理及过程。
（七） 外源基因的表达与应用                           1.外源基因在原核细胞中的表达： 原核生物基因表达的形式 和特点，原核生物基因表达调控序列，原核表达系统的类型， 外源基因在原核细胞中高效表达的策略。                 2.外源基因在真核细胞中的表达： 真核生物基因表达的特 点，真核生物基因表达调控序列，真核表达系统的类型。   3.外源基因表达产物的分离纯化： 重组蛋白分离纯化的基本 原则，His、GST 标签纯化蛋白的原理及过程，透析、超滤等 纯化浓缩重组蛋白的基本技术原理。